تولید هیبریدومای تولیدکننده ی آنتی بادی منوکلونال موشی بر ضد لوسیفراز حشره شب تاب گونه ی فوتینوس پیرالیس

آنتی بادی های منوکلونال توسط سلولهای هیبریدوما که نامیرا هستند ترشح شده و به صورت اختصاصی یک اپی توپ خاص را شناسایی می کنند. هیبریدوما از ادغام سلولهای لنفوسیت میرای تولید کننده آنتی بادی با سلولهای نامیرای میلوما بوجود می آید. آنتی بادی های منوکلونال در مطالعات دارویی، تشخیص بیماریها ودرمان برخی بیماریها مانند عفونتها و سرطانها استفاده می شوند. آنتی بادی ها ابزار مفیدی در دست محققان بوده و منجر به پیشرفتهای قابل توجهی در زمینه دارویی می شوند. لوسیفراز حشره شب تاب گونه ی فوتینوس پیرالیس یک آنزیم گزارش دهنده است که واکنش بیولومینسانس را کاتالیز می کند. لوسیفراز نقش مهمی در تصویر برداری از تومورها ومتاستاز دارد. ما مونوکلونال آنتی بادیهایی علیه لوسیفراز تولید کردیم که برای سیستمهای آشکارساز آزمایشگاهی مثل وسترن بلات،الایزا،ایمونوهیستوشیمی و.... به کار میرود. برای این کار پروتئین لوسیفراز متصل به his-tag، که در e.coliبیان شده بود را با ستون نیکل سفاروز، تخلیص کردیم. پروتئین های تخلیص شده را با روش بردفورد، تعیین غلظت کردیم. چند موش balb/c با 50µgr از آنتی ژن خالص شده برای هر موش، ایمونیزاسیون کردیم. سلول های میلومای موشی(sp2) که برای رسیدن به فاز لگاریتمی رشد،کشت داده شده بودند با سلول های لنفوسیتی بدست آمده از طحال موش ادغام شدند. پس از اینکه سلول های لنفوسیت با میلوما به نسبت 5 به 1 مخلوط شدند peg1500 اضافه کردیم تا سبب ادغام غشای سلول ها در هم شود. پس از 5 بار هیبریداسیون در میان کلنی های بدست آمده، یک کلون هیبریدوما بدست آمد که آنتی بادی های منوکلونال با افینیتی بالا و ویژگی اختصاصی نسبت به لوسیفراز ترشح می کرد. اتصال اختصاصی این آنتی بادی ها به لوسیفراز با الایزا و وسترن بلات نشان داده شد.